一、原理

　　酵母和黴菌是3M檢測片。(PctrifilmTMYeastandMold,PYM)測試片是一種預先準備好培養基的黴菌和酵母計數的卡片。培養基中有冷水可溶性凝膠作為載體，以及5-溴-4-氯-3消化氯-磷酸鹽指示劑作為酵母和黴菌，以及抑製生長的四環素和氯黴素。圓形生長區分為30個1cmx1cm的方塊進行計數。

　　設備和材料

　　溫度培養箱(25℃~28℃)、冰箱(0℃~4℃)、均質器(旋刀式或拍擊式)、移液器、PctrifilmTM測試片壓板、振蕩器、天平(感量0.1g),PctrifilmTM酵母和黴菌測試片，稀釋劑，培養基和試劑，Butterfield's磷酸鹽緩衝液，0.1%蛋白質水。

　　三、步驟

　　1.固體

　　8000r/min均質2min(或放入無菌均質袋中，用均質器拍打2min)，在225毫升稀釋液(磷酸鹽緩衝液或0.1%蛋白水)中加入25g樣品，製成11。:10樣品勻液。

　　2.液體

　　取25mL樣品原液，放入裝有225mL、稀釋液的無菌玻璃瓶中，以30cm的幅度，在7s內震動25次，製成1:10樣品勻液。

　　用10倍的梯度稀釋上述勻液，根據樣品的汙染程度，選擇2-3個合適的連續稀釋度，每個稀釋度接種2個測試片。

　　在平坦的試驗台上放置3M試驗片PYM試驗片，揭開上膜，用移液器在3M試驗片中間加入1ml樣液，輕輕覆蓋上膜，用壓板平穩壓下，使其均勻覆蓋在試驗片的圓形培養麵積上，拿起壓板，靜置1min以上，使培養基凝固。

　　在25℃-28℃下，將測試片的透明麵朝上放置在培養箱內，堆放不得超過20片，培養3d-5d。

　　3.判讀

　　培養3d後觀察計數。如果測試片上的細菌在5d後生長過快，出現邊緣模糊的菌落，則使用3d的計數結果來估計菌落數。

　　在PYM測試片中，顏色均勻，灰白色到藍綠色或粉紅色，沒有深色中間，邊界上的小隆起菌被計算成酵母菌。顏色多樣(棕色、米色、橙色、藍綠色等。)、大型或小型扁平擴散菌落的中間顏色為黴菌。估計菌落數。

　　在PYM測試片中，顏色均勻，灰白色至藍綠色或粉紅色，無深色中心，邊界明顯的小隆起菌被計算為酵母。顏色多樣(棕色、米色、橙色、藍綠色等)。)、大型或小型扁平擴散菌落的中心顏色為黴菌。