（一)原理

　　Pctrifilm TM酵母菌和黴菌(Pctrifilm TM Yeast and Mold, PYM)測試片是一種預先製備好培養基的黴菌和酵母菌計數的卡片。培養基中有作為載體的冷水可溶性凝膠和對酵母菌和黴菌敏感的5-溴-4-氯-3吲哚基-磷酸鹽指示劑，以及抑製細菌生長的四環素、氯黴素。圓形生長區域劃分為30個1 cm x1 cm的方格用來計數。

　　(二)設備和材料

　　恒溫培養箱(25 ℃~28 ℃),冰箱(0℃~4℃),均質器(旋刀式或拍擊式),移液器， Pctrifilm TM測試片壓板，振蕩器，天平(感量0.1 g),培養基和試劑， Pctrifilm TM酵母菌和黴菌測試片，稀釋液， Butterfield's磷酸鹽緩衝液， 0.1%蛋白腖水。

　　（三）操作

　　1.固體

　　以無菌操作將25 g樣品加入到225 mL的稀釋液(磷酸鹽緩衝液或0.1%蛋白腖水)中，8000 r/min均質2 min (或放入無菌均質袋中，用均質器拍打2min),製成1 :10樣品勻液。

　　2.液體

　　取25 mL樣品原液，放入裝有225 mL,稀釋液的無菌玻璃瓶中，以30 cm幅度， 7s內振搖25次，製成1 : 10樣品勻液。

　　將上述勻液做10倍係列梯度稀釋，根據樣品的汙染程度，選擇適宜的2個-3個連續稀釋度，每個稀釋度接種2張測試片。

　　將PYM檢驗測試片放在平坦的實驗台上，揭開上層膜，用移液器將1 ml樣液加到測試片的中央，輕輕覆蓋上層膜，用壓板平穩壓下，使其均勻覆蓋在測試片的圓形培養麵積上，拿起壓板，靜置至少1 min,使培養基凝固。

　　將測試片的透明麵朝上放置於培養箱內，堆疊不能超過20片，在25℃-28 ℃下培養3d-5d。

　　3.判讀

　　培養3d後觀察計數，如果5d後，測試片上的菌生長過快，出現邊緣模糊的菌落，就用3d的計數結果作為估計菌落數。

　　在PYM測試片上，顏色均勻一致，灰白色到藍綠色或粉紅色，沒有暗色中心，邊界明顯的小型隆起菌落計為酵母菌。顏色多樣(棕色、米色、橙色、藍綠色等)、中心顏色深暗的大型或小型扁平擴散菌落計為黴菌。

　　(四)結果計算

　　選取菌落數在15~150之間的測試片計數，平均菌落數乘以稀釋倍數報告。

　　①如果所有稀釋度的測試片上均無菌落生長，則以小於1乘以低稀釋倍數報告。

　　②如果所有稀釋度測試片上的菌落數都小於15,則計數稀釋度低的測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告。

　　③如果高稀釋度的菌落數大於150,計數高稀釋度的測試片上的平均菌落數乘以稀釋倍數報告。計數菌落數大於150個的測試片時，可計數一個或兩個具有代表性方格內的菌落數，換算成單個方格內(1cm2)的菌落數後乘以30即為測試片上估算的菌落數(圓形生長麵積為30 cm)。

　　計數在測試片上出現堆積和彼此覆蓋的黴菌菌落，可將測試片分成幾個區域，計算每個明顯暗色中心的菌落。大量的酵母菌可能會導致整個生長區域呈現藍色，大量的黴菌也可導致整個生長區域呈現藍、黑、黃等顏色，此時測試片中央可能沒有可見菌落，但圓形培麵積的邊緣有許多小型菌落。當發生這種情況時，不要估算菌落數，其結果計為“多不可計“ (too numerous to count, TNTC)。

　　報告每克或每毫升樣品中黴菌、酵母菌數，以“CFU/g或CFU/mL"表示。